Enzo CYTO-ID自噬检测试剂盒特点&作用机制

艾美捷 Enzo CYTO-ID ®自噬检测试剂盒 2.0：一种用于监测活细胞自噬的更明亮、更耐光、无转染的定量检测方法。

CYTO-ID ®自噬检测试剂盒 2.0 使用一种选择性标记积累的自噬泡的新型染料测量自噬泡并监测溶酶体抑制的活细胞中的自噬通量。该染料已通过识别可滴定功能部分进行了优化，该部分允许对溶酶体进行最小染色，同时在掺入前自噬体、自噬体和自噬溶酶体（自噬溶酶体）时表现出明亮的荧光。该测定提供了一种快速和定量的方法来监测活细胞中的自噬，而无需细胞转染。

艾美捷 Enzo CYTO-ID ®自噬检测试剂盒组分：

CYTO-ID ® Green Detection Reagent 2

Hoechst 33342 核染色

自噬诱导剂（雷帕霉素）

氯喹对照

10X 检测缓冲液

艾美捷 Enzo CYTO-ID 自噬检测试剂盒特点：

1.没有转染试验消除了转染效率验证的需要

2.更亮、更耐光的染料可特异性染色自噬囊泡

3.溶酶体的可忽略不计的染色降低了其他染料的背景

4.快速量化天然异质细胞群中的自噬

5.促进自噬激活剂和抑制剂的高通量筛选

艾美捷 Enzo CYTO-ID ®自噬检测试剂盒作用机制：

该探针是一种阳离子两亲示踪剂 (CAT) 染料，它以与诱导磷脂沉积的药物类似的方式快速分配到细胞中。仔细选择染料上的可滴定功能部分可防止其在溶酶体内积聚，但可以标记与自噬途径相关的液泡。

艾美捷 Enzo CYTO-ID ®自噬检测试剂盒化学性质：

应用：流式细胞术、荧光显微镜、荧光检测、HTS

质量控制：显微镜检查：当 CYTO-ID® Green 自噬检测试剂 2 掺入细胞中时，通常会在细胞核周区域的球形空泡中、在整个细胞质中分布的病灶中或在这两个位置中观察到这种荧光探针的积累，具体取决于根据正在研究的细胞类型。与按照用户手册所述制备的自噬样品相比，未诱导的细胞显示出非常低的背景染色。

数量：对于 -0200 尺寸：

200 次流式细胞仪检测、250 次显微镜检测或 3 x 96 孔微孔板检测。

-0050 尺寸：

50 次流式细胞仪检测、60 次显微镜检测或 1 x 96 孔微孔板检测。

使用/稳定性：通过适当的存储，试剂盒组件自收到之日起可稳定使用一年。

处理：避光。避免冷冻/解冻循环。

在蓝冰上运送

短期储存：-20°C

长期储存：-80°C

 

 

图：基于微孔板的 HepG2 细胞自噬分析。在 DMSO（对照）、0.5 µM 雷帕霉素 (Rap)、10 µM 氯喹 (CLQ) 或 0.5 µM Rap 和 10 µM CLQ 中培养 20 小时后，HepG2 细胞被 CYTO-ID® Green Detection Reagent 2 染色。细胞也用 Hoechst 33342 染色以进行细胞数标准化。用 CYTO-ID® Green Detection Reagent 2 测量，用雷帕霉素和氯喹处理的细胞自噬增加。

文献参考：

1.Air Plasma-Activated Medium Evokes a Death-Associated Perinuclear Mitochondrial Clustering: M. Suzuki-Karasaki, et al.; Int. J. Mol. Sci. 23, 1124 (2022), Abstract;

2.Cellular Effects of Cyclodextrins: Studies on HeLa Cells: Á. Rusznyák, et al.; Molecules 27, 1589 (2022), Abstract;

3.CNS serotonin content mediating food deprivation-enhanced learning is regulated by hemolymph tryptophan concentration and autophagic flux in the pond snail: Y. Totani, et al.; Nutr. Neurosci. (2022), Abstract;