Abbexa丨Abbexa动物组织 PCR 试剂盒提取说明书

艾美捷Abbexa 的动物组织 PCR 试剂盒使用独特的裂解缓冲液来裂解新鲜或冷冻的动物组织和血液。所得裂解液无需纯化，可直接作为模板进行PCR扩增。

 

 

艾美捷Abbexa 动物组织 PCR 试剂盒套件内容：

零件 100 rxns × 20 µl 系统 500 rxns × 20 µl 系统

AD1 缓冲器 4毫升 20 毫升

AD2 缓冲器 1 毫升 5毫升

AD3 缓冲器 4毫升 2 × 10 毫升

2X PCR SuperMix（含染料） 1 毫升 5×1毫升

无核酸酶水 5毫升 25 毫升

艾美捷Abbexa 动物组织 PCR 试剂盒使用说明：

1.基因组 DNA 提取：

①在即将进行检测之前，以 4:1 的比例制备 AD1/AD2 Buffer 混合溶液（例如 40 µl AD1 Buffer 和 10 µl AD2 Buffer）并彻底混合。50 µl AD1/AD2 缓冲混合溶液足以处理 1 个样品/反应。该混合物可在室温下储存长达 2 小时。

②准备样品如下：

哺乳动物细胞- 推荐检测量：≤ 10 6 个细胞

通过离心沉淀细胞并去除上清液。向沉淀中加入 50 µl AD1/AD2 Buffer 混合溶液，并通过上下吹打彻底混合。

唾液或血液- 推荐的检测量：≤ 10 µl

将唾液或血液加入 50 µl 的 AD1/AD2 缓冲混合溶液中，并通过上下移液器彻底混合。

动物组织- 推荐检测量：≤ 10 mg（鼠尾：≤ 0.5 cm；鼠耳：≤ 0.5 cm 2）

使用无菌刀片或剪刀将组织切成小块。加入 50 µl AD1/AD2 Buffer 混合溶液，上下吹打彻底混合。

3.在室温下静置 10 分钟（对于毛发组织等难以裂解的样品，可以将样品混合物在 55 °C 下孵育 10 分钟），然后在 95 °C 下孵育 3 分钟。

4.加入 40 µl AD3 Buffer，然后彻底混合。裂解物可用作 PCR 模板，在 2-8 °C 下保存长达 3 个月，或在 -20 °C 下保存长达 6 个月。

2.反应成分：

零件 体积 最终浓度

未纯化的裂解物 可变（≤ 4 µl） 按要求

正向引物 (10 µM) 0.4微升 0.2 µM

反向引物 (10 µM) 0.4微升 0.2 µM

2X PCR SuperMix（含染料） 10微升 1X

无核酸酶水 多变的 不适用

总容积 20微升 不适用

3.热循环条件：

循环次数 温度 每个周期的时间

1个周期 94℃ 5-10分钟

30-35 个周期 94℃ 30秒

50-60°C 30秒

72℃ 1-2 kb/分钟

1个周期 72℃ 5-10分钟

艾美捷Abbexa 动物组织 PCR 试剂盒使用注意事项：

1.确保样品和试剂在用于检测前已完全解冻并充分混合。

2.如果观察到微弱的条带，请增加 PCR 模板的使用量或增加 PCR 循环数（最多 40 个循环）。

3.如果观察到非特异性扩增条带，请调整退火温度或减少 PCR 模板的使用量。