Nanoprobes Ni-NTA-Nanogold——用于 His 标签标记和检测

艾美捷 Nanoprobes Ni-NTA-Nanogold 特点：

1.10 nm Ni-NTA-Nanogold®新的！直接 EM viualization 的最佳尺寸 用于嵌入后标记

2.5 nm Ni-NTA-Nanogold®直接进入EM -无需银/金增强！

3.1.8 nm Ni-NTA-Nanogold®非常适合冷冻电镜：最小的探头：最佳穿透力和最高分辨率

Ni-NTA-Nanogold ®设计用于使用电子显微镜、光学显微镜或印迹检测或定位多组氨酸 (his) 标记的融合蛋白。

Ni-NTA-Nanogold ®包含一个 1.8 nm 或 5 nm Nanogold® 颗粒，其中多个镍-次氮基三乙酸官能团结合到金颗粒表面的配体中。镍-次氮基三乙酸官能团与标记蛋白中的组氨酸结合，并形成具有J低解离常数的稳定复合物。

使用Nanoprobes Ni-NTA-Nanogold ®，可以在非变性或变性条件下标记源自多种表达载体中的任何一种的带his标签的融合蛋白。当与金或银增强试剂（例如GoldEnhance™或HQ Silver）一起使用时，可以通过显微镜或印迹观察标记的带 hist 标签的融合蛋白。

10 nm Ni-NTA-Nanogold®——无需银或金增强，同时保留原始 1.8 nm 和 5 nm 探头的高分辨率。

整个探针的大小与未标记的 IgG 分子相似，但较大的金颗粒可以在没有银或金增强的标准 TEM 下清晰可见，即使在较宽的视图中，例如厚切片和整个细胞。由于较大的金，印迹灵敏度将比较小的尺寸更高。

1.高可见度：10 nm 金颗粒高度单分散，在大多数没有银或金增强的样品中，在 TEM 分辨率下清晰可见。

2.用于标记任何带 His 标签的融合蛋白的通用探针：这简化了标记，因为它可用于标记许多不同的靶标，而无需生成不同的抗体。它还可以与不同尺寸的金颗粒或银或金增强的 Nanogold ®一起用于多种标记研究。

3.较精确的标记分辨率：次氮基三乙酸 - Ni(II) 螯合物与金表面之间的联系比抗体或蛋白质小得多，因此结合的金更靠近其目标：我们估计与金颗粒表面的距离His 标签的长度约为 2 nm。另外，这是一个初级探针：没有二级抗体来增加与目标的距离。使用 NTA-Ni(II)-Nanogold ®以分子分辨率定位蛋白质复合物或其他大分子组装体中的位点。

4.高溶解性、生物相容性和稳定性：10 nm Ni-NTA-Nanogold ®是使用稳定、高度亲水的表面功能化制备的。

5.强结合：Ni(II)-NTA 的结合常数非常高，这是由于多个组氨酸结合的螯合效应和多个 Ni(II)-NTA 功能的靶结合的结合。解离常数估计在10 -7到10 -13 M -1之间。对于许多应用，这提供了与抗体相当的结合强度。

6.高穿透性：10 nm Ni-NTA-Gold 的大小与未标记的抗体 IgG 分子相似，并且比 10 nm 胶体金-抗体偶联物小得多。因此，它可以比 10 nm 免疫金探针更好地渗透到样本中并进入空间受限的内部位点，而无需额外的未标记初级质量，并提供更高的标记密度。在某些系统中，它可以用于更强的固定或更少的透化，从而使标记具有更好的超微结构保存。

7.超高灵敏度：当用于检测印迹上带有 His 标签的目标时，较大的金颗粒提供最高的灵敏度，几乎没有背景。

上图：NTA-Ni(II)-5 / 10 nm Nanogold ®的结构，显示了掺入的金属螯合物与带 His 标签的蛋白质的结合。从金颗粒表面到 His 标签的距离估计为 1.5 nm。上图：5 nm NTA Nanogold的透射电子显微照片：平均直径 5.11±0.84nm。

 

艾美捷Nanoprobes Ni-NTA-Nanogold ®探针的应用：

1.以纳米精度阐明蛋白质结构的混合方法：

由 Wei-hau Chang 博士小组开发(Chang, 2013)

1）在 cryo-EM 中同时使用 1.8 nm 和 5 nm Ni-NTA-Nanogold® 以获得更好的单粒子分析

2）结合 FRET 进一步完善您的蛋白质图谱并观察相互作用过程中的构象/位置变化

2.用于 EM 的镍染色 His-tags：对含有重组 His-tagged 蛋白质的蛋白质、蛋白质复合物或细胞器进行高分辨率标记，用于 TEM 或 STEM 定位。

3.组织切片中带His标签的蛋白质的“通用”预嵌入标记，用于电子显微镜观察。

4.在 Ni-NTA 柱纯化过程中识别馏分中的 His 标签蛋白。

5.检测印迹和凝胶中的重组 His 标签蛋白。

6.用于图像分析和结构求解的规则结构的重原子标记。

7.用于 EM 的蛋白质融合标签的金标记