Worthington血浆胺氧化酶 (PAO) 说明书

血浆胺氧化酶 (PAO) 催化反应：

RCH 2 NH 2 + O 2 + H 2 O → RCHO + NH 3 + H 2 O 2

牛血浆胺氧化酶的分子量为 170 kDa，精胺的最适 pH 值为 6.2，亚精胺的最适 pH 值为 7.2。胺氧化酶分为两类：血浆胺氧化酶所属的含吡哆醛和铜的酶，以及含FAD的氨基氧化酶。天然底物包括儿茶酚胺、色胺衍生物和其他生理活性胺。血浆胺氧化酶用于需要氮基转移的研究。该分子由两条相同的多肽链组成。每个分子有两个磷酸吡哆醛和两个 Cu +原子。牛血浆胺氧化酶受铜螯合剂、许多羧基试剂如铜酮、羟胺和氰化物的抑制。苯甲酸和苯甲醇都是非竞争性抑制剂（KI = 30 和 34mM 分别）。Worthington 采用的测定胺氧化酶的测定法基本上是 Tabor等人，JBC， 208，645，(1954) 的测定法，反应温度降至 25°C。

艾美捷Worthington 血浆胺氧化酶 (PAO)化学性质：

稳定性/储存： -20°C 可稳定保存 12 个月。储存在-20°C。

单位定义：在 25°C、pH 7.2 条件下，1 个国际单位每分钟氧化 1µmole 苄胺。

技术说明： 1 IU 等于 4,330 Tabor 单位。(TU)

 

艾美捷Worthington 血浆胺氧化酶 (PAO)测定方案： 

方法: Kapeller-Adler (1971) 彻底审查了胺氧化酶的测定。Worthington 采用的方法本质上是 Tabor等人的方法。(1954) 反应温度降至 25°C。

反应速度由苄胺氧化引起的 250 nm 处吸光度的增加来确定。在指定条件下，在 25°C 和 pH 7.2 条件下，一个单位会导致每分钟氧化 1 微摩尔苄胺。如此定义的一个国际单位相当于 4330 个泰伯尔单位（泰伯尔和泰伯尔，1972 年）。

试剂：

67 mM 磷酸钾缓冲液 pH 7.2

1.0% v/v (0.10 M) 苄胺（如果有颜色，重新蒸馏）在 67 mM 磷酸钾缓冲液中，pH 7.2（底物）

酶：

在 67 mM 磷酸钾缓冲液（pH 7.2）中溶解至浓度为 10 mg/ml。

程序：

将分光光度计调整到 250 nm 和 25°C。将 2.8 ml 缓冲液和 0.1 ml 底物溶液倒入每个比色杯吸管中。

在分光光度计中孵育 3-4 分钟以达到温度平衡并建立空白率（如果有）。加入 0.1 ml 酶溶液并记录 A 250增加6-8 分钟。从曲线的线性部分计算 ΔA 250 /分钟。可能会出现 2-3 分钟的延迟，之后反应应与 A 250为 0.75 呈线性关系。

艾美捷Worthington 血浆胺氧化酶 (PAO)相关参考文献：

1.Achee, F., Chervenka, C., Smith, R., and Yasunobu, K.: XII. The Association and Dissociation, and Number of Subunits of Beef Plasma Amine Oxidase , Biochemistry 7, 4329, 1968

2.Bachrach, U.: Metabolism and Function of Spermine and Related Polyamines , Annu Rev Microbiol 24, 109, 1970

3.Bachrach, U.: Function of Naturally Occurring Polyamines,, Academic Press, NY, , 1973

4.Bachrach, U., and Reches, B.: Enzymic Assay for Spermidine , Anal Biochem 17, 38, 1966