ImmunoChemistry艾美捷牛膜联蛋白V-荧光素凋亡检测试剂盒方案

ImmunoChemistry艾美捷牛膜联蛋白V-荧光素细胞凋亡检测试剂盒提供了一种经验证的方法，可使用重组荧光素结合的牛膜连蛋白V和碘化丙啶（PI）快速、轻松地区分两个死亡细胞群和活细胞群。这些细胞将被膜联蛋白V-荧光素（绿色荧光）和碘化丙啶（红色荧光）双重标记。结果可通过流式细胞仪进行分析。

膜联蛋白V是具有血管抗凝血活性的钙和磷脂结合蛋白家族的成员。体外实验结果表明，它可能通过与凝血酶原竞争磷脂酰丝氨酸（PS）结合位点而在抑制凝血中发挥作用。在健康细胞中，PS通常保存在细胞膜的内小叶（胞质侧）。当细胞发生凋亡时，最早的可检测指标之一是膜不对称性的丧失。PS不再局限于膜的胞质部分，而是转移到外小叶，并暴露在细胞表面。免疫化学技术公司的牛膜联蛋白V-荧光素细胞凋亡检测试剂盒提供了一种经验证的方法，可使用重组荧光素结合的牛膜连蛋白V和碘化丙啶（PI）快速、轻松地区分两个死亡细胞群和活细胞群。具有完整细胞膜和表面暴露PS（凋亡的一个显著特征）的细胞将被膜联蛋白V-荧光素染色为阳性。PI包含在试剂盒中，用于识别已丧失质膜完整性的晚期凋亡细胞。这些细胞将被膜联蛋白V-荧光素和碘化丙啶双重标记（绿色和红色荧光）。假设没有治疗或细胞周期相关事件暂时暴露正常内化的带负电荷的PS实体，具有完整质膜的活的非凋亡细胞将排除PI，并且将保持不被膜联蛋白V-荧光素探针染色。该试剂盒还包括一种特殊配制的钙基结合缓冲液，这是发生膜联蛋白V结合所需的。使用流式细胞仪分析结果。

ImmunoChemistry艾美捷牛膜联蛋白V-荧光素凋亡检测试剂盒化学性质：

靶细胞凋亡

激发/发射膜联蛋白V-荧光素–494 nm/521 nm PI–536 nm/617 nm

分析方法流式细胞术

样品类型细胞培养

储存2-8°C

协议：

准备样品和对照品。

用DiH2O稀释10X结合缓冲液1:10。

在冰冷的培养基或PBS中清洗细胞两次，然后以5 x 105–1 x 106细胞/mL的速度重新悬浮在冰冷的1X结合缓冲液中。

在1mL膜联蛋白重组缓冲液（1X）中重组牛膜联蛋白V-荧光素。

在PBS中稀释重组膜联蛋白V-荧光素1:5。

将稀释的Annexin V-Fluorescein以约1:10添加到每个样品中。

在PBS中稀释PI 1:10。

以约1:20的比例向每个样品中加入稀释的PI。

在冰上孵育15分钟，避光。

向每个样本添加400µL 1X绑定缓冲液。

用流式细胞仪分析。膜联蛋白V-荧光素在494nm激发，在521nm发射。PI在536nm激发，在617nm发射。

ImmunoChemistry艾美捷牛膜联蛋白V-荧光素凋亡检测试剂盒组分：

Bovine Annexin V-Fluorescein, lyophilized, 1 vial, #6641

Annexin Reconstitution Buffer, 1X, 1 mL, 1 vial, #6639

Annexin Binding Buffer, 10X, 10 mL, 3 bottles, #6640

Propidium Iodide, 250 µg/mL, 1 mL, 1 vial, #638