艾美捷小鼠肿瘤坏死因子α-ELISpot试剂盒使用指南

ELISpot Plus for enumeration of cells secreting TNF-α

This kit is ideal for users who want a convenient and sensitive assay. The assay is designed for the enumeration of cells secreting mouse TNF-α. The kit includes ELISpot plates pre-coated with monoclonal antibody, biotinylated detection antibody, Streptavidin-ALP and ready-to-use BCIP/NBT-plus substrate.

Pre-coated plates reduce assay time and minimize variability.

艾美捷小鼠肿瘤坏死因子α-ELISpot试剂盒基本参数：

中文名称：小鼠肿瘤坏死因子α-ELISpot试剂盒

英文名字：ELISpot Plus: Mouse TNF-alpha (ALP)

编号：3511-4APW-2

规格：2plates

应用程序：ELISpot

反应性：老鼠

BCIP/NBT加基质（25 ml）

检测抗体在含0.02%叠-氮化钠的无菌过滤（0.2μm）PBS中提供。Streptavidin ALP以0.1M Tris缓冲液和0.002%Kathon CG提供。小瓶已过满，以确保回收规定量。

存储：在环境温度下运输。到达时，所有试剂应在4-8°C下冷藏储存。板材应保持在室温下。

艾美捷小鼠肿瘤坏死因子α-ELISpot试剂盒使用指南：

A ELISpot板的制备（无菌条件）

1.从密封包装中取出平板，用无菌PBS（200μl/孔）洗涤4次。

2.用含有10%与细胞悬浮液相同血清的培养基（200μl/孔）调节平板。在室温下培养至少30分钟。

B在平板中培养细胞（无菌条件）

1.取出培养基，加入刺激物，然后加入细胞悬浮液。或者，细胞和刺激物可以在加入平板之前混合。

2.将平板置于37°C的含5%CO2的加湿培养箱中，培养12-48小时。在此期间不要移动板，并采取措施避免蒸发（例如，用铝箔包裹板）。

C斑点检测

1.通过清空平板去除细胞，并用PBS（200μl/孔）洗涤5次。

2.在含有0.5%胎牛血清（PBS-0.5%FCS）的PBS中将检测抗体（MT11B10生物素）稀释至0.5μg/ml。加入100μl/孔，在室温下孵育2小时。

3.如上所述清洗板（步骤C1）。

4.将Streptavidin ALP（1:1000）在PBS-0.5%FCS中稀释，并加入100μl/孔。在室温下孵育1小时。

5.如上所述清洗板（步骤C1）。

6.通过0.45μm过滤器过滤即用基质溶液（BCIP/NBT plus），并添加100μl/孔。直到出现明显的斑点。

7.通过在自来水中大量冲洗来阻止颜色发展。如果需要，移除暗渠（板下的软塑料）并冲洗膜的下侧。

8.让盘子保持干燥。在ELISpot读取器或解剖显微镜中检查和计数斑点。

9.在室温下将盘子存放在黑暗中。