艾美捷重组蛋白酶K，无动物源/AF化验方法

蛋白酶K（PROK）是一种具有广泛作用的丝氨酸内肽酶，从真菌Tritirachium album liber的滤液中分离出来。

艾美捷重组蛋白酶K，无动物源/AF特征：

特异性：

除了肽键的裂解，它还能够催化肽酰胺水解。蛋白酶K被氟磷酸二异丙酯（DFP）或苯基甲烷磺酰氟（PMSF）灭活。螯合剂如柠檬酸盐和EDTA对酶活性没有影响。

应用：

蛋白酶K在分离高度天然、未受损的DNA或RNA中非常有用，因为大多数微生物或哺乳动物的DNA和RNA都被酶快速灭活，特别是在0.5-1%SDS存在下。

艾美捷重组蛋白酶K，无动物源/AF其它性质：

分子量：28900道尔顿。

最佳pH值：7.5-12，以变性血红蛋白为底物。

存储：PROK/PROKR：储存温度为2-8°C；PROKS/PROKRS：储存温度-20°C

沃辛顿PROK/PROKR是一种高纯度冻干粉末。代码PROKS/PROKRS是含有50%甘油的20mg/ml溶液。两者均经测试不含DNase和RNase。

艾美捷重组蛋白酶K，无动物源/AF化验方法：

蛋白酶K水解用尿素变性的血红蛋白，并释放Folin阳性氨基酸和肽，这些氨基酸和肽被确定为酪氨酸当量。1个单位在37°C、pH 7.5下释放1μmol Folin阳性氨基酸，使用变性血红蛋白作为底物。

试剂

0.05 N HCl-稀释0.82 ml浓度。用试剂级水将HCl稀释至200ml。

0.5 M NaOH-将4.0 gm NaOH溶解在200 ml试剂级水中。

缓冲底物-将2.0克血红蛋白溶解在35毫升试剂级水中，加入36.0克尿素和16毫升0.5 M NaOH。室温下搅拌30-60分钟。加入0.618克硼-酸并搅拌。用5 N HCl将pH调至7.5，并将qs.调至100 ml。

酪氨酸标准（2.5 nmol/L）-将45.3 mg酪氨酸溶于100 ml 0.05 N HCl中。

0.3 M三氯乙酸-将9.8 gm三氯乙酸溶解在200 ml试剂级水中。

Folin试剂-将10 ml Folin Ciocalteus苯-酚试剂添加到20 ml试剂级水中。

相关文献：

Bernabeu, C. , Conde, P. , Vasquez, D. and Ballesta, J.

Peptidyl Transferase of Bacterial Ribosome: Resistance to Proteinase K , Eur J Biochem 93 , 527 , 1979

Betzel, C. , Pal, G. , Struck, M. , Jany, K. and Saenger, W.

Active-Site Geometry of Proteinase K: Crystallographic Study of Its Complex with a Dipeptide Chloromethyl Ketone Inhibitor , F.E.B.S. Lett. 197 , 105 , 1986