Worthington肽合成应用丨胰凝乳蛋白酶方案

胰凝乳蛋白酶背景：

胰凝乳蛋白酶是一种由胰腺腺泡细胞产生的丝氨酸内肽酶。在胰蛋白酶对糜蛋白酶原进行蛋白水解后，糜蛋白酶被激活。当胰蛋白酶在赖氨酸和精氨酸处水解时，胰凝乳蛋白酶选择性地切割由芳香残基（酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸）形成的肽键（Hedstrom等， 1992）。两种主要形式的胰凝乳蛋白酶 A 和 B 在牛胰腺中的含量相等。它们是非常相似的蛋白质（80% 相同），但具有显着不同的蛋白水解特性（Hartley 1964、Meloun等人1966、 Smillie 等人1968 和 Graf等人2004）。以下信息主要与 A 型糜蛋白酶原和糜蛋白酶有关。

Worthington胰凝乳蛋白酶特异性：

胰蛋白酶通过裂解精氨酸和异亮氨酸（R15 和 I16）之间的键来激活胰凝乳蛋白酶，从而导致结构修饰和底物结合位点的形成（Sears 2010）。胰凝乳蛋白酶与胰蛋白酶的不同之处在于胰蛋白酶在精氨酸和赖氨酸残基处切割肽，而胰凝乳蛋白酶更喜欢大的疏水残基（Hedstrom等， 1992）。胰凝乳蛋白酶优先催化涉及酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸的 L-异构体的肽键的水解。它也很容易作用于敏感氨基酸的酰胺和酯。胰凝乳蛋白酶对大疏水残基的特异性可以通过由残基 189 到 195、214 到 220 和 225 到 228 形成的疏水 S1 结合来解释（Cohen等人， 1981）。

尽管胰蛋白酶和糜蛋白酶的 S1 位点结构仅显示出一个差异（在 189 位），但胰蛋白酶和糜蛋白酶的定点诱变未能互换特异性，这表明胰蛋白酶和糜蛋白酶实现底物特异性催化的机制尚不完全清楚。 Steitz等人1969 年和 Graf等人1988 年）。

艾美捷Worthington胰凝乳蛋白酶分子特征：

糜蛋白酶 A 和 B 具有 80% 的序列同一性（Hartley 1964、Meloun等人1966、 Smillie 等人1968 和 Gráf等人2004）。催化三联体（H57、D102 和 S195）的氨基酸在 S1 家族的肽酶序列中高度保守（Gráf et al. 2004）。214 位的丝氨酸在家族中也是高度保守的，并且已被提议作为催化三联体的第四个成员（Ohara等人1989 和 McGrath等人1992）。

艾美捷Worthington胰凝乳蛋白酶的4个应用：

1.序列分析

2.肽合成

3.肽图

4.肽指纹图谱

相关研究：

羧肽酶 B (COBC/COBPMS)

羧肽酶 Y (COY)梭菌蛋白酶, Endo-Arg-C (CP)

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胰蛋白酶、SequENZ (TRSEQII/TRSEQZ )

胰蛋白酶抑制剂 (LBI/OI/SI/SIC)