Jackson ImmunoResearch 用于蛋白质印迹的偶联物方案

Jackson公司用于蛋白质印迹的偶联物前言：

3 种检测方法可用于蛋白质印迹：比色法、化学发光法和荧光法。每种检测方法在灵敏度、定量、每次检测成本或多重检测方面都具有优势。

蛋白质印迹是一种用于从生物样品或溶液中鉴定特定蛋白质的分析技术。线性化的蛋白质通过凝胶电泳分离以按大小分辨它们，然后转移到固定蛋白质的膜上，例如硝酸纤维素或聚偏二氟乙烯( PVDF)。用针对特定目标蛋白质的一抗探测膜。然后使用与报告分子偶联的二抗来识别一抗并产生所需的信号。

Jackson公司：比色检测

碱性磷酸酶 (AP) 和辣根过氧化物酶 (HRP) 偶联物可用于比色检测（图 1(A)）。偶联的报告酶催化显色底物转化为有色沉淀物，直接在印迹膜上显现。比色检测可以提供快速且容易获得的结果，而无需昂贵的检测器或广泛的优化。

Jackson公司：化学发光检测

酶联偶联物也可用于化学发光信号检测（图 1(B)）。HRP 偶联物通过将化学发光底物 (鲁米诺) 氧化为发光形式来产生信号。

当酶将特定底物（例如 1,2-二氧杂环丁烷）去磷酸化为发光产物时，AP 结合物会产生信号。

然后可以通过将胶卷暴露在膜上或使用冷却的电荷耦合器件 (CCD) 相机来捕获信号。化学发光检测具有出色的灵敏度，但对多个目标的定量和探测可能会受到限制，开发可能需要改进以优化信号捕获。

Jackson公司：荧光检测

荧光信号检测使用荧光染料偶联物来显示膜上的抗原（图 1 (C)）。特定于染料光谱特性的波长的光用于激发荧光染料。吸收的光将染料的电子激发到更高的电子状态，当它们返回基态时，它们会以荧光团的发射波长特征发射光子。光线由配备适当滤光片的数字成像仪检测。荧光蛋白质印迹允许定量分析和多重探测，而无需剥离和重新印迹。

 

 

备注：

图 1：Western 印迹的 3 种检测方法：(A) 比色法、(B) 化学发光法和 (C) 荧光法；A. 报道酶偶联物催化显色底物转化为有色不溶性沉淀物，在印迹膜上肉眼可见。B. 报道酶偶联物催化化学发光底物转化为发光形式的反应，发射的光通过X射线胶片或CCD相机检测。C. 报告荧光染料被其特征波长的光激发，产生的发射光被数字成像仪捕获。

表 1：检测方法的特点——优缺点

参考文献：

Alberts B et al (1994) Molecular biology of the Cell. 3rd Ed. Garland press. London

Roitt et al (2005) Immunology. 6th Ed. Mosby. Spain