worthington丨worthington用于细胞收获的胰蛋白酶

前面讲了细胞分离技术方法和材料的使用酶、基本原代细胞分离、酶促细胞收获等几种，接下来一起看看艾美捷worthington方法和材料之用于细胞收获的胰蛋白酶。

1916 年，Rous 和 Jones 使用“Merck、Brubler 和 Kahlbaum 的胰蛋白酶粉末”消化活细胞在其中生长的血浆凝块，以获得用于传代培养的细胞悬液。1934 年，Vogelaar 和 Erlichman 是下一个研究人员，他们利用粗胰蛋白酶制剂中的消化酶来液化人成纤维细胞在传代培养之前生长的凝固血浆。Scherer、Syverton 和 Gey 于 1953 年引入了类似于今天使用的胰蛋白酶技术，以收获当时新培养的 HeLa 细胞株，用于继代培养和生化分析。这些工作人员测试了重结晶胰蛋白酶和 NF 1:250 胰蛋白酶的细胞收获，发现纯化的胰蛋白酶更有效，对细胞的毒性更小。尽管如此，NF 1：

相对粗制的胰腺制剂如 NF 1:250 胰蛋白酶今天仍然用于细胞收获，尽管它们表现出相当大的批次间变异性并含有外来物质和其他酶活性。粗胰蛋白酶中的杂质会对细胞造成不必要的损害并降低克隆效率。使用更高纯度的结晶胰蛋白酶可以消除许多这些困难。

NF 1:250 材料中存在的任何污染物似乎都不是细胞收获活性所必需的，因为纯化的胰蛋白酶对单层解离非常有效，而粗制 NF 1:250 胰蛋白酶加大豆胰蛋白酶抑制剂无效。

McKeehan 和Ham 报告说，在低温（即4°C）下用结晶胰蛋白酶收获时，在低血清培养基中单细胞的活力和增殖潜力显着提高。

 

 

艾美捷worthington解离酶：胰蛋白酶

胰蛋白酶是一种胰腺丝氨酸蛋白酶，对涉及碱性氨基酸、精氨酸和赖氨酸的羧基的肽键具有特异性。胰蛋白酶是已知的特异性最高的蛋白酶之一，尽管它也表现出一些酯酶和酰胺酶活性。

单独纯化的胰蛋白酶通常对组织解离无效，因为它对细胞外蛋白几乎没有选择性。纯化的胰蛋白酶和其他酶如弹性蛋白酶和/或胶原酶的组合已证明对解离有效。

“胰蛋白酶”也是商业供应商对胰酶的名称，胰酶是从猪胰腺中提取的蛋白酶、多糖酶、核酸酶和脂肪酶的粗混合物。NF 1:250 是一种常用的“胰蛋白酶”制剂，在国家处方集规定的测定条件下，它具有蛋白水解消化 250 倍于其重量的酪蛋白的能力。重要的是要认识到这种测定程序对胰蛋白酶没有特异性，尽管胰酶确实含有这种酶。尽管有命名法，但像 NF 1:250 和 1:300 这样的粗“胰蛋白酶”被广泛用于解离组织，这可能是因为胰蛋白酶和污染性蛋白水解和多糖酶活性确实会优先攻击细胞外基质。然而，看来，

在组织培养实验室中，研究人员使用纯化的胰蛋白酶将细胞从培养容器内表面上生长的单层释放到悬浮液中。大多数源自正常组织且不高度适应人工培养条件的细胞以单层形式生长，即粘附在培养容器内表面上的一层细胞厚度为一个细胞。由于此类细胞更像正常组织中的细胞，因此许多组织培养研究人员正在研究在单层培养中生长的细胞。

单层培养物通常在玻璃或聚苯乙烯滚瓶、培养瓶或培养皿中生长。用于组织培养工作的塑料容器经过特殊处理，以确保细胞良好地粘附在容器壁上。有关细胞收获的详细讨论，请参阅本指南的第 xv 页。

用于细胞分离程序的一些最常用的纯化胰蛋白酶等级是 Worthington 代码：TL、TRL、TRLS 和 TRLVMF。这些都适用于细胞收获以及组织解离。