Kamiya丨Kamiya艾美捷大鼠成纤维细胞生长因子2说明书

Kamiya艾美捷大鼠成纤维细胞生长因子2，碱性（FGF2）ELISA预期用途：

该试剂盒是一种夹心酶免疫分析法，用于在体外定量测量大鼠FGF2血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解物、细胞培养上清液和其他生物液体。对于仅供研究使用。

Kamiya艾美捷该试剂盒组件：

试剂  数量

预涂，即用96孔条形板1

校准器2

校准稀释剂1×20 mL

检测试剂A 1×120μL

检测试剂B 1×120μL

测定稀释剂A 1×12 mL

测定稀释剂B 1×12 mL

TMB基质1×9 mL

停止溶液1×6 mL

洗涤缓冲液（30X浓缩液）1×20 mL

96口井的封板器4

存储：

所有试剂应按照小瓶上的标签保存。校准器、检测试剂A、检测试剂B和96孔带板应在收到后储存在-20°C，而其他试剂温度应为4°C。未使用的板条应保存在密封袋中，并提供干燥剂尽量减少接触潮湿空气。打开的测试试剂盒将在1个月内保持稳定，前提是将其储存为如上所述。

Kamiya艾美捷大鼠成纤维细胞生长因子2试验原理：

本试剂盒中提供的微孔板已预涂有FGF2特异性抗体然后将样品加入到适当的微孔板孔中，加入生物素缀合的抗体接下来，将与辣根过氧化物酶（HRP）缀合的阿维丁添加到每个微孔板孔中培养。加入TMB底物溶液后，仅含有FGF2、生物素缀合的孔抗体和酶结合的Avidin将呈现颜色变化。通过加入硫酸溶液终止，并测量颜色变化在450nm±10nm的波长下进行分光光度测定。样品中FGF2的浓度为然后通过将样品的外径与校准曲线进行比较来确定。

试剂制备：

使用前，将所有套件组件和样品置于室温（18-25°C）。如果不使用该套件一次性用完，请只取出本次实验的试纸和试剂，剩下的在所需条件下使用试纸条和试剂。

用1.0 mL校准品稀释剂重新配制校准品，在室温下保持10分钟，轻轻摇动（不要起泡）。储备溶液中校准品的浓度为4000 pg/mL。请首先将储备溶液稀释至1000 pg/mL，稀释后的校准品为最高值校准器（1000 pg/mL）。然后准备7支含有0.5 mL校准稀释剂的试管，并使用稀释的校准器，以根据下图所示的图片产生双稀释系列。混合每根管子在下一次转移之前彻底清除。设置7个稀释校准器点，250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL，31.2 pg/mL和15.6 pg/mL，以及最后一支带校准仪的EP管稀释剂为空白，为0 pg/mL。

化验程序：

1.确定稀释校准品、空白和样品的孔。准备7口井用于校准器，1口井用于空白的将100µL稀释的校准品（读取试剂制备）、空白和样品加入适当的井。用板密封剂覆盖。在37°C下孵育1小时。

2.去除每个井的液体，不要清洗。

3.向每个孔中加入100µL检测试剂A工作溶液，用平板覆盖孔密封并在37°C下孵育1小时。

4.吸入溶液，并使用喷射瓶用350µL 1X冲洗溶液冲洗每个孔，多通道移液管、歧管分配器或自动清洗机，并静置1~2分钟。删除通过将板扣在吸水纸上，将所有孔中的液体完全保留。完全清洗3时间。最后一次洗涤后，通过抽吸或滗析去除剩余的洗涤缓冲液。反转把它放在盘子里，用吸水纸吸住。

5.向每个孔中加入100µL检测试剂B工作溶液，用平板覆盖孔密封并在37°C下孵育30分钟。

6.如步骤4所述，重复抽吸/洗涤过程共5次。

7.向每个孔中加入90µL基质溶液。用新的板材密封剂覆盖。培养10-20 37°C时为分钟（不要超过30分钟）。避光。加入后，液体会变成蓝色基板溶液的。

8.向每个孔中加入50µL停止溶液。加入停止溶液后，液体将变黄。轻敲盘子的侧面，混合液体。如果颜色变化不均匀，请轻按以确保充分混合。

9.去除盘子底部的水滴和指纹，确认没有气泡在液体表面上。然后，运行微板读取器并在450 nm处进行测量立即。