文章信息
题目:Sugar transporter TaSTP3 activation by TaWRKY19/61/82 enhances stripe rust susceptibility in wheat
刊名:New Phytologist
作者:Baoyu Huai,Zhensheng Kang,Jie Liu et al.
单位:Northwest A&F University
日期:21 June 2022
01
摘要
寄主植物的糖外流对于病原体的存活和增殖至关重要。糖转运蛋白介导的宿主糖再分配有助于植物-病原体相互作用。然而,很少有研究关注在宿主定植期间如何战略性地操纵糖易位。
为了阐明这个问题,小麦糖转运蛋白 (STP) TaSTP3 响应于Puccinia striiformis ( Pst ) 感染的特征,通过小麦中 RNA 干扰和过表达揭示STP在Pst感染过程中的潜在作用。此外,进一步确定了调节TaSTP3表达的转录因子。
结果表明,TaSTP3 定位于质膜并作为己糖和蔗糖的糖转运蛋白发挥作用。TaSTP3增强了小麦对Pst的敏感性,并且TaSTP3的过表达导致蔗糖积累增加和防御相关基因的转录抑制。此外,TaWRKY19、TaWRKY61 和 TaWRKY82 被鉴定为TaSTP3表达的正转录调节因子。
我们的研究结果表明,Pst诱导的糖转运蛋白TaSTP3被 TaWRKY19/61/82 转录激活,并可能通过提高蔗糖浓度促进小麦对条锈病的易感性,并表明TaSTP3是小麦对条锈病抗性的强靶点。
02
技术路线
wheat (Triticum aestivum) cv Suwon11 (Su11) and the Pst isolate CYR31
RNA extraction, reverse transcription quantitative PCR, and sequence analysis
Primers, strains, and plasmid constructs
BSMV-mediated transient gene silencing
Histological observation
Generation of transgenic Arabidopsis and wheat
Transient expression in plants
Heterologous expression of TaSTP3 in yeast
Split-ubiquitin analysis
Extraction and quantification of soluble sugars
RNA-Seq and data analysis
Yeast one-hybrid assay
Transactivation assay in plants
03
主要结果
3.1 推测糖转运蛋白TaSTP3在小麦Pst感染期间被诱导。
为了更好地理解STPs在小麦Pst-定殖中的作用,我们首先试图全面表征STP在小麦基因组中的分布。为此,我们使用来自水稻的STP序列作为小麦基因组数据库(EnsembPlants)中的BLAST搜索查询,该数据库显示了小麦基因组中总共79个STP(表S3)。然后,我们使用推测的TaSTP以及来自水稻和拟南芥的STP的全长蛋白质序列生成了最大似然(ML)系统发育树(图S1)。
为了确定哪些TaSTP对Pst感染有反应,我们从实验中搜索转录组数据(http://www.wheat-expression.com/)数据库。结果表明,接种Pst后,79个转运体中的5个(TaSTP3、TaSTP6、TaSTP13、TaSTP25和TaSTP26)被诱导,TaSTP2表达最显著(图S2)。由于先前的研究表明TaSTP6和TaSTP13对Pst感染有反应,因此我们使用RTqPCR检测了其他三个基因的相对表达谱。我们发现,TaSTP3的所有三个亚基因组拷贝(即TaSTP3-2A、TaSTP3-2 B和TaSTP3-3 D)在小麦Pst相互作用过程中均高度转录上调(图S3a),这与转录组数据一致,而TaSTP25和TaSTP26仅表现出轻微的表达差异(图S3b,c)。因此,我们在随后的功能表征分析中关注TaSTP3。
使用从小麦基因组序列中产生的特异性引物(表S1),我们从感染Pst的Su11小麦品种收集的RNA中扩增了TaSTP3每个亚基因组拷贝的全长cDNA。三个拷贝显示98.93%(图S4)核苷酸序列同一性和99.74%(图S5)氨基酸同一性。使用隐马尔可夫模型(TMHMM)和Pfam分析进行的跨膜预测表明,TaSTP3含有12个跨膜结构域(TMD)(图S6)。综上所述,这些发现表明,TaSTP