ImmunoChemistry艾美捷Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒方案

膜联蛋白V是具有血管抗凝血活性的钙和磷脂结合蛋白家族的成员。体外实验结果表明，它可能通过与凝血酶原竞争磷脂酰丝氨酸（PS）结合位点而在抑制凝血中发挥作用。在健康细胞中，PS通常保存在细胞膜的内小叶（胞质侧）。当细胞发生凋亡时，最早的可检测指标之一是膜不对称性的丧失。PS不再局限于膜的胞质部分，而是转移到外小叶，并暴露在细胞表面。

通过ImmunoChemistry艾美捷Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒，免疫化学技术提供了一种经验证的方法，可以使用Annexin V-FITC和碘化丙啶（PI）试剂快速、轻松地区分两种死亡细胞和活细胞。细胞凋亡早期，细胞膜完整，PS表面暴露，Annexin V-FITC染色呈阳性。PI包含在凋亡检测试剂盒中，用于识别晚期凋亡和坏死细胞，这些细胞已失去质膜完整性。这些细胞将被膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶双重标记（绿色和红色荧光）。假设没有治疗或细胞周期相关事件暂时暴露正常内化的带负电荷的PS实体，则具有完整质膜的活细胞将排除PI并保持不被膜联蛋白V-FITC探针染色。该试剂盒还包括一种特殊配制的钙基结合缓冲液，这是发生膜联蛋白V结合所必需的。

ImmunoChemistry艾美捷Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒化学性质：

靶细胞凋亡，暴露的磷脂酰丝氨酸

激发/发射488nm/530 nm

分析方法流式细胞术

样品类型细胞培养

储存2-8°C

ImmunoChemistry艾美捷Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒组分：

Annexin V-FITC, 200X, 50 µL, 1 vial, #6340

10X Binding Buffer, 1.7 mL, 3 vials, #6341

Propidium Iodide, 250 µg/mL, 1 mL, 1 vial, #638

Kit Manual

协议：

准备样品和对照品

用diH2O稀释10X结合缓冲液1:10。

在冰冷的培养基或PBS中洗涤细胞，并重新悬浮在冰冷的1X结合缓冲液中。

在PBS中稀释膜联蛋白V-FITC 1:10。

在PBS中稀释碘化丙啶（PI）1:2。

将稀释的Annexin V-FITC以1:20的比例添加到每个样品中（每100µL培养细胞等分试样5µL）。

将稀释的PI以1:20的比例添加到每个样品中（每100µL培养细胞等分试样5µL）。

培养约10分钟，避光。

通过向每个样品中添加250µL 1X结合缓冲液来稀释样品。

用流式细胞仪分析。膜联蛋白V-FITC在494nm处最佳激发，在519nm处发射（通常在FL1中读取）。PI在536nm处最佳激发并且在617nm处具有峰值发射（通常在FL3中读取）。