点成分享 | 结核杆菌培养基的制备全过程

结核分枝杆菌，俗称结核杆菌、结核菌，它是引起结核病的病原体。1882年由德国细菌学家郭霍（Robert Koch，1843-1910）发现并证明为人类结核病的病原菌，该菌可侵犯全身各器官，其中引起的肺部疾病——肺结核最为多见，是严重影响人类生命健康的传染病之一，成为了全球尤其是发展中国家最为严重的全球性卫生问题。对于结核杆菌的研究，仍是全世界研究人员重点研究内容之一，研究人员往往需要较多的样本量基础，相关培养基的批量制备和储存就尤为重要了。

结核杆菌常用的培养基是罗氏培养基，全称为罗-琴（Lowenstein-Jensen）培养基。

罗氏培养基的主要组成成分及参考量如下：

磷酸二氢钾2.4g；一水硫酸镁0.24g；拘掾酸镁0.6g；天门冬素3.6g；马铃薯淀粉30g；2％孔雀绿水溶液20ml；蒸馏水600ml；甘油12ml；新鲜鸡蛋液1000ml

罗氏培养基的制备方法及步骤：

1. 在无菌区间内，将上述材料中的磷酸二氢钾、硫酸镁、拘掾酸镁、天门冬素和甘油溶解与蒸馏水中并加热
2. 在加热的同时加入马铃薯淀粉并不断搅拌，在沸水中水热1小时，再置于56度水浴锅中水浴1小时；
3. 用肥皂水清洗鸡蛋，之后用70%的酒精擦洗，晾干；
4. 无菌条件下打破蛋壳，将蛋白蛋黄装入灭菌容器中，充分搅拌混匀，之后用无菌纱布进行过滤，得到新鲜鸡蛋液；
5. 将鸡蛋液加入到一开始准备的混合液中，并加入灭菌的2％孔雀绿水溶液，均匀混合，避免气泡；
6. 将混合好的溶液分装到灭菌的试管内并封闭，每支试管液量在6-8ml左右；
7. 将试管放在架子上并保持一定斜度，然后放在蒸汽浓缩器（例如点成TBT-T100IN结核菌培养基制备仪）中，在85℃的水浴中静置50分钟来浓缩培养基；
8. 之后取出并放置于4℃冰箱中低温保存备用；
9. 使用时取出并恢复到室温，检查培养基是否污染即可，一般建议一个月内使用。

在制备罗氏培养基的过程中，需要用到一些必要的仪器，如用于恒温控制的水浴锅、用于消杀病毒细菌的灭菌器、还有专门用于批量浓缩凝固培养基的蒸汽浓缩器等，点成均可提供以上设备，还可以提供无菌环境的超净工作台，满足实验需求。

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