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  • 艾美捷T7 RNA聚合酶化学性质&文献参考


    噬菌体T7 RNA聚合酶是一种DNA依赖性RNA多聚酶(99kDa),对含有T7噬菌体启动子的DNA序列的体外RNA合成进行催化。高浓缩版T7 RNA聚合酶HC非常适合建立和优化高产量的体外转录反应。所提供的T7 IVT设置缓冲液、MgCl2和DTT溶液能够测试不同的反应条件,例如核苷酸/MgCl2浓度。

    艾美捷T7 RNA聚合酶化学性质:

    仅供体外使用!

    运输:凝胶包装运输

    储存条件:-20°C储存

    避免冻融循环

    保质期:12个月

    纯度:≥ 95%(SDS-PAGE)

    形式:液体

    浓度:2.0–2.2μg/μl(T7 RNA聚合酶HC储存缓冲液中的A280,ɛ=140 l mmol-1 cm-1[1])

    J小优化的分析设置建议:HighYield T7 RNA合成试剂盒(#RNT-101)。

    活性:1μl T7 RNA聚合酶HC在37°下10分钟内产生>/=30μg RNA。这相当于1000 U NEB的T7 RNA聚合酶(高浓度),#M0460T(活性测定条件:1x T7 IVT建立缓冲液,补充10 mM DTT、12 mM MgCl2、3 mM NTPs、1μl T7 RNA聚合酶HC和1μg DNA模板(1.4 kpb RNA转录物),20μl。用荧光微板测定法测定RNA产量。)

    艾美捷T7 RNA聚合酶包含:

    T7 RNA Polymerase HC

    1x 50 μl (2 μg/μl)

    50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 100 mM NaCl, 5 mM DTT, 0.1 % Triton-X-100, 50 % Glycerol (v/v), pH 8.0

    T7 IVT Set-up Buffer

    1x 200 μl (10x)

    400 mM Tris-HCl (pH 8.0), 20 mM Spermidin

    DTT

    1x 100 μl (100 mM)

    MgCl2

    1x 200 μl (200 mM)

    艾美捷T7 RNA聚合酶相关研究:

    HighYield T7 RNA Synthesis Kit, #RNT-101

    RNAse Inhibitor - recombinant, #PCR-392

    NTP bundle, #NU-1014

    文献参考:

    [1] King et al. (1986) Transcription by T7 RNA Polymerase Is Not Zinc-Dependent and Is Abolished on Amidomethylation of Cysteine-347. Biochemistry25(1):37.

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  • 原文地址:https://blog.csdn.net/Sylvia_sc/article/details/127749740
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