worthington细胞分离技术方法之如何使用酶？

首先一起来看看艾美捷worthington细胞分离技术的方法和材料：

使用酶

基本原代细胞分离

95%O 2 :5%CO 2平衡

研磨

酶促细胞收获

细胞粘附和收获

用于细胞收获的胰蛋白酶

细胞释放程序

然后接下来主要讲的是如何使用酶？

worthington为组织解离应用提供的所有酶均以冻干粉形式提供，以提供方便、多功能和稳定性。因此，它们可在 2 - 8°C 下储存，无需特殊处理即可运输。虽然冻干使酶的运输和储存更容易，但在打开任何小瓶时都需要特别小心。

冻干的蛋白质往往具有很强的吸湿性，因此不应在潮湿的地方打开它们。确保任何小瓶在打开前已达到室温。理想情况下，小瓶应在打开前至少半小时从冰箱中取出，并放在干燥器中。在打开任何小瓶之前，请确保它摸起来一点也不凉。只要遵循这些预防措施，本节中引用的所有细胞分离酶都可以反复加热至室温，然后放回冰箱。

一旦用培养基或缓冲液稀释，蛋白水解酶就会发生自溶。使用前立即溶解酶。

必须特别注意脱氧核糖核酸酶 (DNASE)。该产品很容易发生剪切变性。轻轻混合。

重组酶不应储存在 2 - 8°C。如有必要，可以将它们等分并在 -20°C 下冷冻。避免重复冻融循环。

所有酶在重组后都可以通过 0.22 µm 孔径的膜进行无菌过滤。

一般来说，细胞分离过程中使用的大多数酶（胰蛋白酶除外）可以直接溶解在平衡盐溶液或选择的缓冲液中。最初应通过在 0.001 N HCl 中重构酶来制备胰蛋白酶的储备溶液。该溶液可以在使用前立即稀释到消化培养基或缓冲液中。

下表是艾美捷worthington列出的标准平衡盐溶液及其参考文献，有助于选择合适的解离溶液。

 

 

a  Amounts are given as grams per liter of solution

b  In some instances the values given represent calculations from data presented by the authors to account for the use of hydrated or anhydrous salts

c  S. Ringer, J. Physiol. (London) 18, 425 (1895)

d  M.V. Tyrode, Arch. Int. Pharmacodyn. Ther., 20, 2025 (1910)

e  R.C. Parker, Methods of Tissue Culture, 3rd ed., p. 57, Harper, New York, 1961

f  G.O. Gey and M.K. Hey, Am J. Cancer, 27, 55 (1936)

g  W.R. Earle, J. Natl. Cancer Inst, 4, 165 (1943)

h  T.T. Puck, S.J. Cieciura, and A. Robinson, J. Exp. Med. 108, 945 (1958)

i  J.H. Hanks and R.E. Wallace, Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 71, 196 (1949)

j  PBS, phosphate-buffered saline

k  R. Dulbecco and M. Vogt, J. Exp. Med., 99, 167 (1954)