细胞分离研究丨Worthington梭菌蛋白酶方案

梭菌蛋白酶（内蛋白酶-Arg-C）背景：

梭菌蛋白酶是一种半胱氨酸激活的蛋白酶，与胶原酶和其他蛋白酶一起存在于溶组织梭菌的培养滤液中。它对精氨酸的羧基肽键的特异性及其对硫醇和钙离子的依赖性是独特的。

Worthington梭菌蛋白酶特异性：

梭菌蛋白酶以较低的速率选择性地水解精氨酰键和赖氨酰键。它还可以作为转肽酶，在 pH 7.6-9.0 时具有最大活性（Anderson 1985，以及 Fortier 和 MacKenzie 1986）。

艾美捷Worthington梭菌蛋白酶分子特征：

重链和轻链均由具有 1581 个核苷酸开放阅读框 (ORF) 的单个基因编码。基因表达后，整个 ORF（信号区、前区和 9 个氨基酸肽接头）被转录。翻译后加工产生异二聚体活性酶（Dargatz  et al.  1993）。  

活化剂：

巯基要求：二硫苏糖醇、半胱氨酸或其他还原剂

钙离子是bi不可少的

还原剂

抑制剂：

乙二胺四乙酸

氧化剂

巯基试剂（如 TLCK）（Porter et al. 1971）

Co 2+、Cu 2+、Cd 2+和重金属离子

柠檬酸盐、硼酸盐和 Tris 阴离子部分抑制

艾美捷Worthington梭菌蛋白酶的5个应用：

1.肽图

2.序列分析

3.细胞分离 (Wang et al. 2004)

4.酰胺键的水解/缩合

5.肽合成 (Meiwes et al. 1991)

相关文献：

1.Gilles, A.、Imhoff, J. 和 Keil, B.： 梭菌蛋白酶高活性形式的化学特性、活性和硫醇含量 ， J Biol Chem 254 , 1462, 1979

2.Gilles, A.、Lecroisey, A. 和 Keil, B.：α-梭菌蛋白酶轻链的初级结构 ， Eur J Biochem 145 , 469, 1984

3.Homandberg, G.、 Komoriya , A. 和 Chaiken, I.： 非结合肽片段的酶促缩合使用分子阱 ， 生物化学 3385、3385、1982