原理说明书艾美捷魔力红组织蛋白酶B活性分析试剂盒

艾美捷ICT魔力红组织蛋白酶B活性分析试剂盒被研究人员用来定量和监测培养细胞和组织中的组织蛋白酶活性。

Quantitate and monitor intracellular cathepsin-B activity over time in vitro. The Magic Red substrate in this assay fluoresces red upon cleavage by active cathepsin enzymes. Analyze the fluorescent signal using fluorescence microscopy or a fluorescence plate reader.

Kit 937: 25 Tests

Magic Red Substrate (MR-RR2), 1 25 Test Vial, #6133

Hoechst 33342, 1 mL, #639

Acridine Orange, 0.5 mL, #6130

Kit Manual

Kit 938: 100 Tests

Magic Red Substrate (MR-RR2), 1 100 Test Vial, #6134

Hoechst 33342, 1 mL, #639

Acridine Orange, 0.5 mL, #6130

Kit Manual

艾美捷ICT 魔力红组织蛋白酶B活性分析试剂盒原理：

将基质直接添加到细胞培养基中，孵育并分析。因为它是细胞渗透性的，它很容易穿透细胞膜和内部细胞器的膜——不需要裂解或渗透步骤。如果组织蛋白酶是活性的，魔红底物被裂解，甲酰紫荧光团将在激发时变为荧光。随着酶活性的进展和更多魔红底物的裂解，信号将增强，使研究人员能够观察颜色随时间的变化。样品可通过荧光显微镜或荧光板读取器进行分析。试剂盒中包括Hoechst 33342和吖啶橙，分别用于检测核形态和溶酶体细胞器结构。

参数：

试剂名称MR-RR2

靶向组织蛋白酶B

激发/发射592 nm/628 nm

荧光板读数器、荧光显微镜的分析方法

样品类型细胞培养

储存2-8°C

艾美捷ICT 魔力红组织蛋白酶B活性分析试剂盒准备样品和对照品：

通过加入DMSO重新配制魔力红。

通过加入diH2O稀释魔力红1:10。

向每个样品中加入20µL魔红（约500µL培养细胞等分试样）。

避光培养。

观察颜色在15分钟内开始显现。

如果需要，用其他污渍标记，如Hoechst、DAPI或抗体。

如果需要，修复单元格。

用荧光显微镜或荧光板读取器进行分析。魔力红的最佳激发波长为592nm，发射波长为628nm。

如果使用贴壁细胞，请参阅手册了解其他方案。

魔力红组织蛋白酶B活性分析试剂盒部分文献参考：

Zhong, W;Rao, Z;Xu, J;Sun, Y;Hu, H;Wang, P;Xia, Y;Pan, X;Tang, W;Chen, Z;Zhou, H;Wang, X. Defective mitophagy in aged macrophages promotes mitochondrial DNA cytosolic leakage to activate STING signaling during liver sterile inflammation. Aging Cell. 2022 May 22; doi: 10.1111/jcpe.13647. Abstract

Browning, CL;Green, A;Gray, EP;Hurt, R;Kane, AB. Manganese dioxide nanosheets induce mitochondrial toxicity in fish gill epithelial cells. Nanotoxicology. 2021 Jan 27; 1-18. doi: 10.1080/17435390.2021.1874562. Article

Lan J, Luo H, Wu R, Wang J, Zhou B, Zhang Y, Jiang Y, Xu J. Internalization of HMGB1 (High Mobility Group Box 1) Promotes Angiogenesis in Endothelial Cells. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2020 Dec;40(12):2922-2940. doi: 10.1161/ATVBAHA.120.315151. Epub 2020 Oct 1. Full Text