艾美捷QuickTiter 逆转录病毒定量试剂盒的制备方案

Cell Biolabs艾美捷QuickTiter逆转录病毒定量试剂盒提供了一种测定逆转录病毒滴度的快速方法。该测定法测量逆转录病毒的病毒核酸含量，可以在纯化病毒之前或之后进行。

试剂的制备：

•1X QuickTiter™ 解决方案C：准备1X QuickTiter™ 溶液C通过稀释提供的2X在去离子水中以1:2储存。将稀释的溶液储存在室温下。

•1XCyQuant®GR染料：根据需要估算1XCyQuant®GR染料的用量包括逆转录病毒RNA标准样品的测定数量。在使用前立即准备1XCyQuant®GR染料，方法是在1X TE中以1:400稀释提供的400X储备液。为了获得最佳效果稀释溶液应与其制备2小时一起使用。

Cell Biolabs艾美捷QuickTiter™逆转录病毒定量试剂盒标准曲线的制备：

1.从200μg/mL，100μg/mL，50μg/mL，25μg/mL，…0创建逆转录病毒RNA标准品

μg/mL（1:2连续稀释），标记九个微量离心管1～9。

2.加入20μL1X QuickTiter™ 溶液C至＃2至＃9管，转移20μL200μg/mL QuickTiter™ 逆转录病毒RNA标准品到＃1和＃2管。将＃2管混合，转移20μL 混合物（100µg/mL）到下一个试管中。重复通过tube＃8的步骤，并使用tube＃9作为空白。

3.将5μL每种稀释液（包括空白）转移至适用于荧光计的微量滴定板。添加向每个包含5µL样品的孔中加入95µL 1XCyQuant®GR染料。读盘子使用480/520 nm滤光片组的荧光读板器。

Cell Biolabs艾美捷QuickTiter™ 逆转录病毒定量试剂盒测定方案：

1.用所需方法在包装细胞系中产生逆转录病毒。

2.将病毒样品（最多2 mL）加入微量离心管中，并将最终体积调节至2 mL

完整的培养基，如含有10%FBS的DMEM。

注意：为了准确定量，必须包括适当的阴性对照。使用相同的

未转染或模拟转染的包装细胞培养基上清液的体积。

3.加入10μlQuickTiter™ 溶液A到测定管中并通过将管倒置几次来混合

时代。在37ºC孵育30分钟。

4.加入20μLQuickTiter™ 逆转录病毒溶液B1，通过倒置混合。立即加入20μL

QuickTiter™ 逆转录病毒溶液B2并通过倒置混合。在37ºC孵育30分钟。

5.12000 g离心10分钟。小心取出并丢弃上清液。去除

最后一位液体，再次以12000 g离心管30秒，然后除去剩余的液体

上清液用小口径移液器吸头避免吸出沉淀。

6.加入20μL1X QuickTiter™ 溶液C溶解沉淀，涡旋混合10分钟

秒。

7.以12000g离心5分钟。将5μL上清液转移至适合于

荧光计。将95μL新制备的1XCyQuant®GR染料加入含有5μL的孔中

上清液。使用480/520 nm滤光片组，用荧光读板器读板。

8. 根据标准曲线计算逆转录病毒滴度

结果示例

下图显示了典型的定量结果。应该使用下面的数据仅限参考。这些数据不应该用来解释实际结果。

图：逆转录病毒RNA标准曲线。QuickTiter™ 逆转录病毒RNA标准品为按照上述说明进行稀释。荧光测量是在SpectraMax Gemini XS荧光计（分子器件），具有485/538 nm滤光片组和530 nm截止。