Kamiya丨Kamiya艾美捷人和动物LBP ELISA说明书

Kamiya艾美捷人和动物LBP ELISA预期用途：

人和动物LBP ELISA已被开发用于定量测定天然和血清，血浆和培养基中的重组人LBP。也适用于牛，猪，兔和狗LBP。仅供研究使用。不用于诊断程序。

Kamiya艾美捷人和动物LBP ELISA原理：

人和动物LBP ELISA是固相夹心酶联免疫吸附测定（酶联免疫吸附试验）。人LBP特异性单克隆抗体用于包被（预包被和封闭模块）。在第一步中，将板与抗原（校准物或样品）一起温育。在此期间孵育后，人LBP被固体结合抗体捕获。样品中存在的未结合材料是通过洗涤除去。现在该板将与特异于人的POD标记的抗体一起温育LBP（第二次孵育）。启示步骤包括TMB作为色原。酶反应停止通过加入终止溶液，用分光光度计测量450nm处的吸收。通过绘制吸收与相应浓度的关系曲线得到校准曲线已知的校准器。运行浓度未知的样品的人LBP浓度与校准器同时，可以从校准曲线确定。

Kamiya艾美捷人和动物LBP ELISA样品制备：

血清，血浆和其他含人LBP的溶液适用于测试。样品在用于测定之前，必须澄清含有可见沉淀物的物质。脂血和溶血探针不可能。样品应在-20°C冷冻长期保存。根据样品中LBP的浓度，必须用稀释缓冲液稀释。对于正常人血清样品，建议稀释1:800。对于动物血清（山羊，绵羊，推荐稀释度为1:2,1:4至1:20），牛LBP 1:10至1:100，猪和兔LBP 1:50至1:200.

测定特性：

正常LBP范围（带人LBP校准器）：

健康献血者中的人LBP：（5-15μg/mL）

牛LBP范围：0.05-2.5μg/mL

绵羊-山羊LBP:10–30 ng/mL

猪-兔LBP:4-10μg/mL

批间变异系数：9.8至17.8取决于浓度

批内变异系数：6.1%

有效范围：5-50ng/mL，线性至25ng/mL

交叉反应：猪，兔，牛，狗，马LBP

特异性：针对免费LBP

Kamiya 人和动物LBP ELISA测定程序：

让所有试剂达到室温并充分混合。

1.样品

移取100μL校准物（50,25,12.5,6.25,3.12,1.5ng/mL=小瓶a-f），参比血清或

将稀释的样品一式两份放入预涂模块（1）的相应孔中并孵育

 

在室温下摇动一小时。

2.用洗涤缓冲液（A）洗涤3次。

3.检测抗体

移取100l检测抗体（E，瓶2），室温培养1

摇床一小时。

4.用洗涤缓冲液（A）洗涤3次。

5.基材

移取100μL底物溶液（D，小瓶9）到每个孔中。在室内黑暗中孵育12-13分钟

不摇动的温度（取决于实验室中的温度）。

6.停止

移取100μL停止溶液（小瓶8）到每个孔。轻轻敲击盘子混合。

7. 在450 nm处读取吸光度（参考波长620）