植物叶绿素测定方法:乙醇提取比色法[1]
将实验材料去除大主脉,在0.0001的天平上称取0.5g左右的叶片至于50ml离心管中,依次加入20ml 95%的乙醇密封,在黑暗条件下室温提取24-36h,直至组织变白,随后用紫外可见分光光度计,在波长665、649和470 nm下分别进行比色。根据各波长的OD值(optical density(光密度)即为吸光度)计算叶绿素a、b和类胡萝卜素的浓度(mg/L),根据求得的浓度再计算出各色素含量(mg/g鲜重表示)。[1]
叶绿素a含量 Ca=(13.95*A665-6.88*A649)
叶绿素b含量 Cb=(24.96*A649-7.32*A665)
类胡萝卜素含量 Cxc=(1000*A470-2.05*Ca-114.8*Cb)/245
求得色素的浓度后,再计算组织中色素的浓度:
叶绿体色素的含量(mg/g)=C*V/(W*1000)
其中:C:色素含量(mg/L)
V:提取液的体积(ml)。即为20
W:样品鲜重(g)。即为0.5
叶绿素总量=叶绿素a含量+叶绿素b含量
[1] 胡秉芬,黄华梨等. 分光光度法测定叶绿素含量的提取液的适宜浓度[J]. 草业科学, 2018, 035(008):1965-1974.